通用型PCR檢測試劑盒利用離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜提取RNA,在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下,以RNA為模板,以引物為起點合成與RNA模板互補(bǔ)的cDNA鏈。在TaqDNA聚合酶的作用下,經(jīng)高溫變性、低溫退火、中溫延伸的循環(huán)。
特點:
1.使用改良型PCR染料,與熒光PCR兼容,此染料功能類似溴酚藍(lán),擴(kuò)增結(jié)束后無需添加上樣液及電泳指示染料即可直接電泳檢測。
2.將Mg2+與含TaqDNA聚合酶的Mix分開,更加穩(wěn)定。
3.Mix中有一定比例的非Taq酶,擴(kuò)增長片段的效率和靈敏度更高。
4.方便,用戶只需準(zhǔn)備模板和引物既可以進(jìn)行PCR實驗。
5.快捷,操作步驟已經(jīng)限度地簡化,能減少污染,降低實驗誤差。
6.產(chǎn)物可直接用于T載體克隆,不需要額外的加A反應(yīng)。
7.染料單獨提供,方便客戶組合。
通用型PCR檢測試劑盒使用及效果:
在無內(nèi)毒素試管中,加入100uL細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液,或待測樣品。再加入100uL鱟試劑溶液,混勻,37ºC溫育T1分鐘。溫育結(jié)束,加入100uL顯色基質(zhì)溶液,混勻,37ºC溫育T2分鐘。溫育結(jié)束,加入500uL偶氮化試劑1溶液,混勻,加入500uL偶氮化試劑2溶液,混勻加入500uL偶氮化試劑3溶液,混勻,靜置5分鐘,于545nm波長處讀取吸光度值。
內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)范圍(EU/mL)為0.01-0.1,T1為60分鐘,T2為6分鐘;內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)范圍(EU/mL)為0.1-1,T1為10分鐘,T2為6分鐘。