海藻糖酶(TREH)真核蛋白操作步驟:
Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細(xì)胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細(xì)胞數(shù)量
Lysis Buffer加入量
107個(gè)
0.5 mL~1 mL
5×106個(gè)
0.2 mL~0.5 mL
5.置于4℃搖床平臺(tái)上,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融
硅膠膜DNA離心吸附柱(大提)收集管(見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品)
硅膠膜離心吸附柱(小提)收集器(見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品)
硅膠膜離心吸附柱系列(15層膜,小提)
硅膠膜離心吸附柱再生液
生物磁珠2:殼聚糖磁珠
生物磁珠2:巰基磁珠(停產(chǎn))
生物磁珠2:醛基磁珠(停產(chǎn))
生物磁珠2:無包被磁珠
生物磁珠:氨基磁珠
生物磁珠:硅基磁珠
生物磁珠:環(huán)氧基磁珠
生物磁珠:羧基磁珠
酸洗玻璃珠系列
微量單鏈DNA定量試劑盒核酸電泳套裝
一站式DNA非變性PAGE電泳套裝
一站式DNA尿素-PAGE電泳套裝
一站式miRNA尿素-PAGE電泳套裝
一站式RNA電泳套裝
核酸電泳液
50×TAE電泳液(2500 mL)
RNA電泳液,10×(100 mL)
RNA電泳液,10×(250 mL)
TBE Running Buffer(TBE電泳液,10×)
超快核酸電泳液(干粉)(20 L)
超快核酸電泳液(干粉)(50 L)
核酸電泳液:50×TAE電泳液(250 mL)
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