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簡(jiǎn)要描述:牛鼻炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒廠(chǎng)家上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品:松脂二葡萄糖苷 Two pinoresinol glucoside 682.66628分子量:C32H42O16*:63902-38-52-羥-6-甲氧喹喔啉 176.17 2- hydroxy -6- methoxy quinoxaline*:91192-32-4分子量: C9H8N2O2
詳細(xì)介紹
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 貨號(hào) |
牛鼻炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒廠(chǎng)家 | Bovine Rhinitis Virus (BRV) RTPCR | BK-P8921 |
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
7-表-10-去乙?;仙即?Deace CAS 78432-77-6 * 規(guī)格: 20mg
蝙蝠葛蘇林堿;daurisoline CAS 70553-76-3 * 規(guī)格: 20mg
阿魏酸鈉;Sodium ferulic CAS 24276-84-4 * 規(guī)格: 20mg
草銨膦;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 77182-82-2 * 規(guī)格: 0.1g
特草定;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 5902-51-2 * 規(guī)格: 0.1g
磺隆;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 79277-27-3 * 規(guī)格: 0.1g
嘧菌酯;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 131860-33-8 * 規(guī)格: 0.1g
克菌丹;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 133-06-2 * 規(guī)格: 0.1g
四螨嗪;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 74115-24-5 * 規(guī)格: 0.1g
生物烯丙;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 28434-00-6 * 規(guī)格: 0.1g
抑菌靈;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 1 * 規(guī)格: 0.1g
阿維菌素;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 71751-41-2 * 規(guī)格: 0.1g
對(duì)羥基-對(duì)照品;有報(bào)告 CAS 123-08-0 * 規(guī)格: 50mg
木糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 58-86-6 * 規(guī)格: 0.25g
正十六烷;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 544-76-3 * 規(guī)格: 0.1g
牛鼻炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒廠(chǎng)家對(duì)二溴 235.91 On the two bromobenzene*:106-37-6分子量: C6H4Br2
對(duì)二芐氧 290.36 On two benzyl oxygen group*:621-91-0分子量: C20H18O2
2-[4-(3-氯-5-三氟甲-2-吡氧)氧]丙甲酯 2-[4- (3-, three, -5-,, f), benzyl chloride, methyl ester, methyl ester 375.73分子量: C16H13ClF3NO4*:69806-40-2
吡氟氯禾靈 Fluorine and chlorine 361.7分子量: C15H11ClF3NO4*:69806-34-4
大黃素甲 Emodin methyl ether 284.26348分子量:C16H12O5*:521-61-9
性品紅6B Fuchsin Acid 6B 872.8271分子量: C40H34N4Na2O12*:4321-69-1
松脂二葡萄糖苷 Two pinoresinol glucoside 682.66628分子量:C32H42O16*:63902-38-5
2-羥-6-甲氧喹喔啉 176.17 2- hydroxy -6- methoxy quinoxaline*:91192-32-4分子量: C9H8N2O2
1-Boc-4-亞甲 197.27 1-Boc-4- methylene piperidine*:159635-49-1分子量: C11H19NO2
1-溴-3,5-二巰 221.13 1- -3,5- two mercapto bromide*:1219501-75-3分子量: C6H5BrS2
2--4-甲氧并噻唑 180.23 2- 4 -甲氧并噻唑*:5464-79-9分子量: C8H8N2OS
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