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簡要描述:病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品:澤蘭黃 CAS 520-11-6 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg異古倫賓 CAS 471-54-5 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg新蘭牡荊苷 CAS 23666-13-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg太子參環(huán)肽B CAS 145459-19-4 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
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技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格 | BK(BK Virus、BKV) PCR | BK-P8879 |
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
?
實(shí)驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
噻嗪;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 69327-76-0 * 規(guī)格: 0.1g
;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS * 規(guī)格: 0.25g
木糖醇-對照品;有報告 CAS 87-99-0 * 規(guī)格: 1g
檸檬酸;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 77-92-9 * 規(guī)格: 0.1g
山梨酸;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 110-44-1 * 規(guī)格: 0.25g
半邊旗5F CAS * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
4-β-D-葡萄糖基-1,3,7-三羥基 CAS 81991-99-3 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
柯皂苷元 CAS 467-55-0 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
纖精 CAS 567-75-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
香紫蘇二醇 CAS 55881-96-4 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
澤蘭黃 CAS 520-11-6 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
異古倫賓 CAS 471-54-5 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
新蘭牡荊苷 CAS 23666-13-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg
太子參環(huán)肽B CAS 145459-19-4 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
蘇丹紅Ⅰ CAS 842-07-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格俾斯麥棕Y Bismarck brown Y 419.31分子量: C18H20Cl2N8*:10114-58-6
S-甲-L-半胱氨酸亞砜 151.18 S- methyl -L- cysteine*:6853-87-8分子量: C4H9NO3S
硫耐爾藍(lán) Nile blue sulfate 732.85分子量: C40H40N6O6S*:3625-57-8
6-溴-2-氯-3-甲喹啉 256.53 6- -2- chloride -3-*:113092-96-9分子量: C10H7BrClN
(ΑR,ΑR)-2,2'-雙(Α-N,N-二甲氨甲)-(S,S)-1,1′-雙(二環(huán)己磷氫)二茂鐵 844.95 (alpha R, alpha R (-2,2'-) - alpha -N, N- two methyl ammonia benzene methyl) - (S, S) -1,1 '- bis (dicyclohexyl hydrogen phosphate) Er Maotie*:494227-35-9分子量: C52H74FeN2P2 10*
1,4-二 329.9 1,4- two iodobenzene*:624-38-4分子量: C6H4I2
4--3-氟吡 112.11 4- amino -3-*:2247-88-3分子量: C5H5FN2
N,N'-二-BOC-1H-1-胍吡唑 310.35 N, N'- two -BOC-1H-1- guanidine pyrazole*:152120-54-2分子量: C14H22N4O4
黃楊堿 Huang Yangjian 402.364分子量:C26H46N2O*:
亞硒 Selenite 128.97分子量: H2O3Se*:7783-00-8
4-甲酸 129.16 4- piperidine formic acid*:498-94-2分子量: C6H11NO2
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