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本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!
產品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
土壤酸性磷酸酶(SACP)測試盒可見分光光度法 | 50管/48樣 | 可見分光光度法 | BK-01S6837 |
商品介紹:
測定意義: 土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷化合物礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉化及其生物有效性,是評價土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響。通常按照其最適pH范圍,分為堿性、中性和酸性三種類型磷酸酶。 測定原理: 堿性環(huán)境中,S-AKP/ALP催化磷酸苯二鈉水解生成和,通過測定酚的生成量即可計算出S-AKP/ALP活性。 自備儀器和用品: 紫外分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水、無水乙醇和甲苯。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
實驗結果判斷我有妙招:
1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
10ku 超氧化物歧化,人 Superoxide Dismutase -20℃保存
250mL Sodium Bicarbonate Buffer(鈉緩沖液),0.5M,pH8.0 Sodium Bicarbonate Buffer,0.5M,pH8.0 常溫保存
1 管 Rosetta-gami(DE3)大腸桿菌 Rosetta-gami(DE3) E.coli Strain -80℃保存
2 ug pRSET C pRSET C 低溫運輸,-20℃保存
250mL 固相RNase清除劑 Surface RNase Erasol 常溫
2 ug pcDNA6-Flag pcDNA6-Flag 低溫運輸,-20℃保存
麥芽汁 Malt Extract Medium 250g
5g 中性紅 Neutral Red 室溫保存
50T 芹菜PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
1 mg Fura-2 AM(鈣離子熒光探針) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
250mL BSA Blocking Buffer in PBS BSA Blocking Buffer in PBS 常溫保存
土壤酸性磷酸酶(SACP)測試盒可見分光光度法GERP/TRIM8/RNF27 環(huán)指蛋白27抗體 規(guī)格: 0.2mlClassical swine fever virus, CSFV 豬瘟毒抗體 規(guī)格: 0.2ml
PID1 磷酸相互作用結構域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlAngiotensin III 管緊張素III抗體 規(guī)格: 0.2ml
CDK5RAP3 周期素依賴性激5激活結合蛋白C53抗體 規(guī)格: 0.2mlHSP47 熱休克蛋白-47抗體 規(guī)格: 0.1ml
Defensin β1 防御素β1抗體 規(guī)格: 0.1mlDC-SIGNR/CD299 CD299抗體 規(guī)格: 0.2ml
C12ORF63 12號染色體開放閱讀框63抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-INPPL1(Tyr1135) 肌醇聚磷酸鹽磷酸樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
ZNF268 鋅指脂蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlUBE2D1 泛素蛋白連接D1抗體 規(guī)格: 0.2ml
STAU2 雙鏈RNA結合蛋白Staufen2抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-PP2A alpha/beta(Tyr119) 磷酸化蛋酸2A(PP2Aα)抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-human IgG 兔抗人IgG 規(guī)格: 1mgCYP1A1 細胞色素P450 1A1抗體 規(guī)格: 0.1ml
C6orf150 6號染色體開放閱讀框150抗體 規(guī)格: 0.2mlCOMP/EPD1/THBS5 軟骨寡聚基質蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
PI 3 Kinase p85 beta 磷脂酰肌醇激p85β抗體 規(guī)格: 0.1mlGSTA3 S轉移A3抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-CPI17 alpha (Thr38) 磷酸化蛋酸激PKC/CPI-17抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Biotin 兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml
Dysferlin Dysferlin蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
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