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實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)測試盒微量法
產品規(guī)格:100管/48樣
檢測方法:微量法
產品貨號:BK-01S6528
產品分類:氨基酸代謝系列
商品介紹:
測定意義: 半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)廣泛存在于百合科蔥屬(如大蒜和洋蔥),十字花科蕓薹屬 (如卷心菜,菜花,西蘭花),以及豆科中的合金歡屬中,并通常被稱為蒜酶(Alliinase)。香菇酸在γ-谷氨酰轉肽酶和半胱亞砜裂解酶的作用下轉化成香菇精,以及產生丙酮酸、乙醛、甲醛和NH3。CSL是內源性甲醛生成的關鍵酶之一,測定CSL活性對于研究食品安全具有重要意義。 測定原理 CSL催化S-甲基-L-半胱亞砜反應產生丙酮酸,與2,肼反應,在堿性條件下顯棕紅色,在510nm下有特征吸收峰。 自備實驗用品及儀器 天平、研缽、離心機、分光光度計、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
50 T GSH試劑盒(肽測試盒)(比色法) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
500mL Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.0 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.0 常溫保存
30次 通用型全基因組擴增試劑盒 Universal WGA Kit -20℃保存
2 ug pLVX-aMHC GFP pLVX-aMHC GFP 低溫運輸,-20℃保存
胰胨瓊脂培養(yǎng)基 250g
1瓶 OKT 11細胞株 OKT 11 低溫運輸和保存
胰化大豆瓊脂(TSAM) 250g
1g 溴甲綠 Bromocresol Green Sodium Salt 室溫保存
250m Triton Lysis Buffer Triton Lysis Buffer 常溫保存
1mL APMSF溶液,10mg/mL APMSF Solution -20℃保存
250mL Sucrose Gelatin Veronal Buffer (SGVB) Sucrose Gelatin Veronal Buffer (SGVB) 常溫保存
半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)測試盒微量法Phospho-JunB (Thr102/Thr104) 磷酸化活化蛋白激B抗體 規(guī)格: 0.2mlCD171/NCAM-L1 神經細胞粘附分子配體1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mammaglobin A 珠蛋白1抗體 0.2mlphospho-P53(Ser37) 磷酸化瘤抑制基因P53抗體 規(guī)格: 0.1ml
CYP450 細胞色素P450單氧化抗體 規(guī)格: 0.1mlHERG/KCNH2/ERG 特異性鉀離子通道蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-ATR/ACTR(Ser428) 磷酸化ATR抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-BTK/BPK(Tyr223) 磷酸化蛋白酪激ATK抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-Goat IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Wee1(Ser123) 磷酸化WEE1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
PAFAH2/Lp-PLA2 脂蛋脂A2抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-CRK (Ser41) 磷酸化CRK抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-IRS1(Ser332/336) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-APP/ABPP(Thr743) 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Cdc25A 細胞分裂周期蛋白25抗體 規(guī)格: 0.1mlSTEAP1 前列跨膜上皮1抗原抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/Cy5 Cy5標記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-rabbit IgG/AP 堿性磷酸(AP)標記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
VWF 管假性友因子/管性友因子抗體 規(guī)格: 0.1mlNogo R 軸索過度生抑制因子受體/Nogo受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
ETK/BMX 非受體性蛋白酪激ETK抗體 規(guī)格: 0.1mlP2RX4 三磷酸苷門控陽離子通道蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-Beta-catenin(Tyr86) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
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