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簡(jiǎn)要描述:多胺氧化酶(PAO)測(cè)試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:志賀氏菌(BCT)增菌液 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g 半固體瓊脂管 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:6ml*10支 堿性蛋白胨水 英文名稱:Alkaline Peptone Water 產(chǎn)品規(guī)格:250g TCBS瓊脂 英文名稱:Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
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注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:多胺氧化酶(PAO)測(cè)試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
檢測(cè)方法:微量法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6472
產(chǎn)品分類:氧化與抗氧化系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 多胺氧化酶是催化生物體內(nèi)多胺氧化的關(guān)鍵酶,通過調(diào)節(jié)體內(nèi)多胺水平和生成物的濃度,參與各種植物體對(duì)逆境脅迫的反應(yīng)和生長發(fā)育過程。 測(cè)定原理: PAO催化多胺氧化產(chǎn)生過氧化氫,在過氧化氫酶存在的條件下與底物顯色,在550nm下有特征吸收峰,通過測(cè)定吸光值增加速率來反映PAO活性。 需自備的儀器和用品: 分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
500mL HEPES Buffered Saline,5X,pH7.4 HEPES Buffered Saline,5X,pH7.4 常溫保存
0.5mL dCTP溶液,100mM dCTP Solution -20℃保存
2 ug pLL3.7-GFP-neo pLL3.7-GFP-neo 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
5次 隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒 Random Primer DNA Labeling Kit Series -20℃保存
1瓶 MuM-2C細(xì)胞株 MuM-2C 低溫運(yùn)輸和保存
MFC瓊脂 MFC Agar 250g
25g 過硫酸銨 Ammonium Persulfate 常溫保存
250mL Veronal Buffered Saline with EDTA (VBSE) Veronal Buffered Saline with EDTA (VBSE) 常溫保存
50mL CM交換介質(zhì) CM Medium 常溫干燥封袋保存
2 ug pTet-Rev-Tight pTet-Rev-Tight 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
100mL 非凍型拭子DNA保存液A (無拭子) Swab DNALOCKER 室溫
多胺氧化酶(PAO)測(cè)試盒微量法AF10/MLLT10 髓系、淋巴、混合系白易位基因10抗體 規(guī)格: 0.1mlSRRM1 絲/相關(guān)核基質(zhì)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-human IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.3mlIL-6 白介素6 規(guī)格: 0.1ml
p70 S6 kinase beta 核糖體蛋白S6激1抗體 規(guī)格: 0.2mlLDHA/LDH 酸脫抗體 規(guī)格: 0.1ml
ZNF471 鋅指蛋白471抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-ERK5( Ser731+Thr733) 磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激5抗體 規(guī)格: 0.1ml
PAI-2/SerpinB2 纖溶原激活物抑制因子2抗體(漿原激活抑制因子-2) 規(guī)格: 0.1mlTIE1 管生成素受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-HER3 (Tyr1289) 磷酸化HER3受體抗體 規(guī)格: 0.1mlHAND2 心臟和神經(jīng)嵴衍生蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
GAGE7/Cancer/testis antigen family 4 member 7 瘤/睪抗原家族4亞型7抗體 規(guī)格: 0.2mlDog IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 規(guī)格: 0.1ml
ADCY8 苷酸環(huán)化8抗體 0.2mlRabbit Anti-Goat IgG/Bio 標(biāo)記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
PRKD3 蛋白激C nu型抗體 規(guī)格: 0.2mlGPR15 G蛋白偶聯(lián)受體15抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-TRIM25(Ser100) 磷酸化雌激素反應(yīng)指狀蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPCDHB15/PCDHB22 原鈣粘蛋白15抗體 規(guī)格: 0.2ml
hnRNP K 異質(zhì)核糖核蛋白K抗體 規(guī)格: 0.2mlMouse Anti-Bov IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
CDK14/PFTK1 周期蛋白依賴性激14抗體 規(guī)格: 0.2mlSATB1 核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
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