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多功能氧化酶(MFO)測(cè)試盒微量法

簡(jiǎn)要描述:多功能氧化酶(MFO)測(cè)試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:60g/L氯化鈉蛋白胨肉湯 英文名稱:60g%/L NaCl Peptone Water 產(chǎn)品規(guī)格:250g 氯化鈉三糖鐵瓊脂 英文名稱:NaCl Triple Sugar Iron Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 胰胨大豆瓊脂斜面(TSA) 英文名稱:Tryptic Soy Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 42℃生長(zhǎng)培養(yǎng)基 英文名稱:42℃gro

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2023-12-28
  • 訪  問  量:405

詳細(xì)介紹

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

產(chǎn)品名稱:多功能氧化酶(MFO)測(cè)試盒微量法

產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣

檢測(cè)方法:微量法

產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6474

產(chǎn)品分類:氧化與抗氧化系列
商品介紹:

測(cè)定意義:

多功能氧化酶又稱混合功能氧化酶,可產(chǎn)生降解反應(yīng),可使原化學(xué)物質(zhì)變?yōu)榈投镜幕驘o(wú)毒的物質(zhì)從體內(nèi)排出;還可產(chǎn)生激活反應(yīng),可使原化學(xué)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為具有親電子性質(zhì),導(dǎo)致毒性增強(qiáng),成為致突變物或終致癌物。近年來(lái)對(duì)混合功能氧化酶系與外源性化學(xué)物質(zhì)相互作用的深入研究,對(duì)于從分子生物學(xué)水平上進(jìn)一步了解外源性化學(xué)物質(zhì)的毒作用具有重要意義。

測(cè)定原理:

MFO催化對(duì)硝基苯甲醚產(chǎn)生對(duì)硝基,在405nm下有特征吸光值。

自備用品:

分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

 

細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。

QQ截圖20220307153537.png 

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

5g 3- 氨基 -9- 乙基咔唑 AEC (3-Amino-9-Ethylcarbazole) 常溫保存

100mL TES Buffer,0.2M,pH7.0  TES Buffer,0.2M,pH7.0  常溫保存

100µL 小鼠抗CBP標(biāo)簽單抗 Anti CBP-Tag Mouse MAb -20℃保存

2 ug pTALEN_v2 (NG) pTALEN_v2 (NG) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

100g RNCTAB (十六烷基基)  常溫

2 ug pDEST20 pDEST20 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

梭菌鑒別瓊脂(DCA) Differentia Clostridial Agar 250g

150mL 丙烯葡聚糖凝膠 S-300 HR Sephacryl S-300 HR  室溫保存

TTC TTC 10g

2 g Tocopherol(抗氧化劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

250ml Glycine Buffer in PBS,0.2M,pH2.5   Glycine Buffer in PBS,0.2M,pH2.5   常溫保存

多功能氧化酶(MFO)測(cè)試盒微量法TRIM36/RNF98  環(huán)指蛋白98抗體 規(guī)格: 0.2ml

Biglycan  骨/軟骨蛋白多糖1抗體 規(guī)格: 0.2ml

GM1(GS)  神經(jīng)節(jié)苷酯抗體 規(guī)格: 0.1ml

DECTIN-1/CLECSF12/beta Glucan Receptor  β葡聚糖受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-horse IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.1ml

FAM151A  FAM151A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

NME1/Nm23-H1/NDKA  瘤抑制基因抗體 規(guī)格: 0.1ml

FAM71A  FAM71A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

srGAP3  神障礙相關(guān)GAP蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-horse IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgM 規(guī)格: 0.1ml

JAMC  連接粘附分子C抗體 規(guī)格: 0.2ml

BAGE4  瘤/睪抗原2.4抗體 規(guī)格: 0.2ml 

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?

對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 


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