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簡要描述:實(shí)驗(yàn)方法學(xué):一、肝素的配制:市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.
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實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱:多酚氧化酶(PPO)測試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
檢測方法:可見分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6420
產(chǎn)品分類:氧化與抗氧化系列
商品介紹:
測定意義: PPO(EC1.10.3.1)主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。 測定原理: PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌,后者在525nm有特征光吸收。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
500mL SDS-PAGE分離膠配膠液 SDS-PAGE Resolving Gel Buffer 4℃保存
2 ug pX260-U6-DR-BB-DR-Cbh-NLS-hSp-Cas9-NSL-H1-shortract-PGK-puro pX260-U6-DR-BB-DR-Cbh-NLS-hSp-Cas9-NSL-H1-shortract-PGK-puro 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
10次 植物mtDNAout
2 ug pETDuet-1 pETDuet-1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
PALCAM瓊脂 PALCAM Agar 250g
5g D(+) 木糖 D(+)-Xylose 室溫干燥保存
1000支 10 μL RNase-free 白吸頭(袋裝帶芯) 常溫
48 T 琥珀酸脫氫測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
50T 志賀菌ipaH 基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2mL UTP溶液,2.5mM
2 ug pLVX-mCherry-N1 pLVX-mCherry-N1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
多酚氧化酶(PPO)測試盒可見分光光度法Rabbit Anti-chicken IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1ml
Socs 3 細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462) 磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體 規(guī)格: 0.1ml
PAF 小板活化因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
BrdU(A7) 溴脫氧尿苷單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml
Delta Opioid Receptor D型片受體抗體 規(guī)格: 0.2ml
SODD Bcl2結(jié)合抗凋亡蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml
VLDL Receptor 極脂蛋白受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-Goat IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
Sema3F 臂板蛋白3F抗體 規(guī)格: 0.1ml
Leptin 瘦素抗體 規(guī)格: 0.1ml
MAGEB3 黑色素瘤相關(guān)抗原B3抗體 規(guī)格: 0.2ml
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