PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?/span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。產(chǎn)品僅用于科研
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱：白細(xì)胞裂解液 
產(chǎn)品規(guī)格： 詳見說明
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-P96470
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；
◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴(kuò)增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強(qiáng)，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對(duì)土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測(cè)分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

特異性熒光標(biāo)記：
TaqMan法
TaqMan探針的特性：
（1）5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對(duì)定量通過內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括絕對(duì)定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的絕對(duì)定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
十六烷基二甲基芐錄化100毫克2～8℃  大鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒 Rat calcitonin gene related peptide,CGRP ELISA Kit
亞油酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))Linoleic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC)  犬(T)試劑盒 Canine Testoterone ELISA Kit  人酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

隱色結(jié)晶紫(標(biāo)準(zhǔn)品)Leucocrystal Violet質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱HumanCyclinD1ELISAKit人細(xì)胞周期素D1(CyclinD1)規(guī)格：96T/48T  豚鼠白介素2(IL-2)試劑盒 Guinea pig ierleukin 2,IL-2 ELISA Kit

三氟胸苷;三氟尿苷(TFT) Trifluridine; Trifluorothymidine質(zhì)量規(guī)格：>98%  大量Lipofusin脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒10/100  髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒 ，英文名： MPO ELISA Kit

四水合輔羧酶;四水合硫胺焦1酸酯Cocarboxylase tetrahydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR  RatIerleukin23,IL-23ELISA試劑盒大鼠白介素23(IL-23)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  Mouseαmannosidase,αManaseELISA試劑盒小鼠α甘露糖苷酶(αManase)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
全氟辛酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析)Pentadecafluorooctanoic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析  膽紅素(Bilirubin)定量檢測(cè)試劑盒50  伯氏疏螺旋體(BB)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

正辛酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC))n-Octanoic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC)  Ratmacrophageinflammatoryprotein3β,MIP-3βELISA試劑盒大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISA試劑盒人復(fù)制蛋白A(RPA-70)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

蓖麻油酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)Ricinoleic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%  小鼠血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  ELISAKitGP-ⅡbⅢa小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa規(guī)格：48T/96T

硬脂酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))Stearic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)  Rat pulmonary surfacta associated protein A (SP-A) ELISA Kit 大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒  HumanChlamydiaachomatis，CTELISAKit人沙眼衣原體抗體(CT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
白細(xì)胞裂解液DESTAININGBAGS脫色袋子RTsigma  酒類L-乳酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20次