當前位置:首頁 > 產(chǎn)品中心 > 基因檢測PCR試劑盒 > 熒光定量PCR > 50次豬細小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
簡要描述:豬細小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒及公司相關(guān)產(chǎn)品EGFR Others Human 人 EGFR / ErbB1 人細胞裂解液 (陽性對照) 運動升壓素Kinetensin質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR豬腎傳代細胞;IBRS-2層粘連蛋白(925-933)Laminin (925-933)質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRCCL21 Others Cynomolgus 食蟹猴 CCL21 / 6Ckine
產(chǎn)品分類
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PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。產(chǎn)品僅用于科研
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱:豬細小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格: 50次
產(chǎn)品貨號:BK-P97048
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產(chǎn)品特點:
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強,反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
特異性熒光標記:
TaqMan法
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對定量通過內(nèi)標定量:
內(nèi)標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
鹽酸頭孢唑蘭 Cefozopran hydrochloride 分子式:C19H17N9O5S2.HCl 分子量:551.99
鹽酸萬古霉素 Vancomycin HCl 分子式:C66H75Cl2N9O24.HCl 分子量:1485.72
鹽酸乙胺丁醇 Ethambutol Hydrochloride 分子式: C10H24N2O2.2(HCl) 分子量:277.23
鹽酸左氧氟沙星 Levofloxacin HCl 分子式:C18H20FN3O4.HCl 分子量:397
克拉霉素 Clarithromycin 分子式:C38H69NO13 分子量:747.96
克林沙星 Clinafloxacin 分子式:C17H17ClFN3O3 分子量:365.79
恩替卡韋 Entecavir 分子式:C12H17N5O4 分子量:295.30
法羅培南(鈉)(2.5水) Faropenem sodium 分子式:2(C12H14NNaO5S).5(H20) 分子量:704.67
紡錘菌素 Netropsin dihydrochloride 分子式:C18 分子量:503.39H26N10O3•2HCl
中性蛋白酶1公斤 人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Phosphatidylcholine 25g/100g/500g/1kg原裝 Sigma P5638 小鼠NANOG同源域蛋白(NANOG)免疫試劑盒 Mouse NANOG Homeobox protein,NANOG ELISA Kit
聚醇嶙酸,英文名或英文縮寫:Ammonium alcohol polyvinyl phosphate,級別:CP,98%,規(guī)格:1克 胃粘液素(GM)ELISA試劑盒 ,英文名: GM ELISA Kit
錄化鋇二水合物 ≥99% Bcrium chloridq dihydrctq 1036-7-9 MouseNeonatalThyroxine,NN-T4ELISA試劑盒小鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
本二酸氫鉀,英文名或英文縮寫:potewwium xy7nogen phthalate,級別:CP,97%,規(guī)格:100克 ELISAKitPEDF兔色素上皮衍生因子規(guī)格:48T/96T
豬細小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒胰胨大豆胨固綠瓊脂shēng huà shì jì容量:100毫升 Humanepstein-barrvirusIgA,EBvIgAELISAKit 人EB病毒IgA(EBvIgA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
(牛肉蛋白胨) HumanFreei-iodothyronineIndes,Free-T3ELISA試劑盒人游離狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
TEBUFFERPH7.0TE緩沖液012x1MLFrozen 組織半胱氨酸蛋白酶-4(CASP
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